为了获得高毒力株，以控制梨紫微的图像，白僵菌菌株从野生萤火虫的表面分离并鉴定白僵菌分子形态和生物学方法。力研究表明，当应变的孢子的浓度达到10 6个孢子/ mL的，死亡率梨
沉香树的为62.5％，这有可能成为紫微梨生物杀虫剂。
键词：球孢白僵菌;来自紫微的梨大象;真菌杀虫剂分类号：S476.12文献代码：AA商品编号：1004-3020（2016）02-0037-03Résumé：为了筛选高致病性菌株Pseudorobitis驼背Redtenbacher，白僵菌属的菌株。
A从一个死萤火虫分离，鉴定为球孢白僵菌其形态特征和分子生物学方法，然后喷以真菌孢子悬浮液用1×106个ml和成年人的校正死亡率为62.5％后15天，这表明球孢白僵菌的应变可以在字段关键字被应用于生物控制对铜绿驼背：白僵菌，Pseudorobitis驼背和真菌杀虫剂Pseudorobitis驼背是一个危害沉香树的主要害虫，主要分布在湖北，山东，江苏，陕西等地[]。
微梨的成虫和幼虫对紫微有害。嫩叶，芽，花，种子年轻老熟幼虫饲料，而幼虫跟踪与花蕾，嫩芽和种子。2]目前，有效的杀虫剂靠在紫微梨是阿维菌素[3]吡虫啉，氰戊菊酯和甲氧西林[]。僵菌是一种真菌杀虫剂，具有对许多农业和森林病虫害[4]良好的控制效果，但不汇报了各项梨紫微生物防治研究。这项研究中，球孢白僵菌的菌株分离并从收集到的森林和通过形态学和分子生物学方法鉴定萤火虫纯化。这项研究中，所述分离的菌株用于测试感染紫微梨实现梨沉香树，从而奠定了它的生物控制的基础的高效和致病株。究结果如下。
料和方法从菌株衍生的菌株来自收集该弹簧林之间的天窗蠕虫。离，纯化和菌株的鉴定通过取菌丝和蛇的主体的表面上的孢子粉直接制造。PDA培养基上培养14天（26℃）后，用含有0.1％无菌水制备的分生孢子吐温-80以1×10 12 / ml的浓度制备的孢子悬浮液然后分别使用接种针。
子悬浮液在每盒3分种植在PDA平板培养基（3个培养皿），设置在等边三角形，最后放置在恒温培养箱中于26℃下在第7，天记录了菌落的形态。此同时，菌丝和孢子少量除去和形态显微镜鉴定。用的rDNA ITS2区域的特定PCR扩增ITS1-5.8S-随后测序对准进行分子生物学鉴定。引物是ITS1F（5-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3 ）和ITS4（5-TCCTCCGCTTATTGATATGCGC-3）PCR系统（25微升）：酶缓冲液10×Taq酶，每个的dNTP 200mm时，MgCl 2的3.7 mm，0.4 Mm引物，Taq 2 U酶，5至10 ng模板DNA。PCR扩增程序如下：94℃1分钟，1个循环，94℃30秒，55℃30秒，72℃30秒，30个循环，最后72℃7分钟。DNA测序由Bao Bioengineering Co.，Ltd。
行。GenBank中查找对等序列。
用喷雾方法测试灵敏度测试。立白僵菌野生菌株PDA培养基上生长14天（26℃）和分生孢子用含有0.1％无菌水制备吐温80以在制备的孢子悬浮液浓度为1×107孢子/ ml。后将溶液在1×106个孢子/ ml和1×105孢子/ ml的孢子悬浮液稀释10倍。择像梨沉香树与出现的同期成年人用于测试和分别孢子悬浮液白僵菌组喷在昆虫。个治疗组10个头，重复4次。一些水作为对照。
理后，将其在27±1℃，60-80％相对湿度，放置在人工气候室和L：d = 14：10，和沉香树叶鲜，未受污染的中重构时间。第3天，第7天和第15天观察到测试的昆虫的死亡。亡的判断：触摸昆虫的身体与昆虫针和领带死亡，如果没有采取行动。查数据和统计分析死亡的昆虫的数量被认为感染后第3，第7和第15天，死亡率用公式计算，校正死亡率统计计算。
昆虫死亡率（％）=感染前活虫数 - 感染（％）= PT-CK的感染效果之前昆虫活着的数感染后×活的昆虫×100的数目CK-100）×100式中：PT - 与细菌溶液的昆虫死亡率CK处理后 - 对照群体的死亡率是由DPS2000软件复杂分布的新方法进行分析。果和讨论形态学和分子生物学菌株的分离物生长PDA培养基中的菌落呈白色，霜霉病上，以同心环，无皱褶的平坦表面和一个辐射沟。显微镜下，分生孢子光滑，无色，并确定该菌株属于半知属，性别性别半知，Hyphomyceres，性别和性别Moniliales白僵菌。述分离株的序列已经在GenBank中检索已发现，具有与应变的同源性最高的菌株白僵菌和同源性为100％。的形态鉴定结果相结合，所述分离的菌株鉴定为白僵菌。
敏度测试的结果示于表1中萤火虫蠕虫的分离的菌株具有到成虫良好的灵敏度。药后15天，1×106个孢子/ ml和1×107个孢子的孢子悬浮液/ mL的是一个大于60％的防除效果。此，该菌株有可能成为紫微梨成年人特定生物农药的潜力。论紫微是一个很好的观赏性花园和一个大型的观赏价值和经济价值绿色行道树。5]紫微梨的图像发现，第一次在2007年，并引起紫微在泰安市严重损害，其次是紫微报告国家有害于湖北，安徽[3-6] 。杆晚上整个沉香树发展阶段，并且具有以下特征：人口众多，快速扩散和破坏的周期长，其降低了显著沉香树的观赏价值和威胁种子的繁殖[7]。何有效防止梨子病已成为森宝研究人员的一个重要课题。僵菌是一种具有广泛的宿主范围，持续性好，环保，无害于人类和动物的生物农药。4]此外，工业生产白僵菌是相对成熟的，并且可以用于生物控制批量生产。
这项研究中分离的球孢白僵菌菌株显示出对昆虫在森林能有效地控制成人喷雾白僵菌沉香树speciosa.Selon成年生物特性的强灵敏度，并提供生物控制的一种新手段。考文献[1]李琰，周广丰郁丽英和他的合作者，毒性室内和室外测试效率的测定八种药物对成人紫微梨[J]疾病和森林害虫中国，2013，32（4）：30〜33。2]王巨鹰周成刚，谯如噙等，一个新的有害生物严重危害沉香树 - 大象梨紫微[J]。国森林.Parasites 2010年，29（4）：18-20。3]俞可平，闳称偎胡于进和其他阿维菌素图像梨紫微[J]。北林业科技的毒力评估中，2010，（6）：30〜31 [4]查吁冯，陈靖远，夏建平研究和应用白僵菌防止森林害虫[J]湖北科学森林技术球孢白僵菌，2010（3）：40 -42，39 [5]小翠严，范医蓉，剖面分析和资源应用状态紫微遗传物质[J]。北农业科学，2009，13（1）：16-17，20 [6]昌镇汤，汤延平康Ke等，生活史和研究在紫微梨的危险特性。州西南[J]。京林业大学学报（自然科学版），2015，39（6）：177〜180。
7]刘搭椽，
沉香树周成刚李岩等人，引起梨和沉香树损害之间的关系。薇（Lagerstroemia indica）的生长发育[J]。虫学杂志，2011，33（3）：302-307。
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