采用改良CTAB法提取
沉香树叶片基因组DNA，紫外分光光度计测定琼脂糖凝胶电泳。果表明，提取的DNA没有显着降解，表现出高浓度和一般纯度。到的DNA可以在随后的分子生物学实验中使用。
键词：沉香树; DNA;改良CTAB法;提取;判定分类号：Q936文献代码：A码DOI：10.3969 / j.issn.1006-6500.2013.09.001Isolation和从沉香树大号.JIA平1庸，YU湛蓉2，张宏基因组DNA的纯化mei3，5，Yi4，5RésuméSUN：在这项研究中，沉香树的基因组DNA用改良CTAB法分离。脂糖凝胶电泳和分光光度计紫外线的结果显示出良好的完整性，高浓度和沉香树的puits.LADN提取物的纯度可以在其他分子实验中使用关键词：沉香树（Lagerstroemia indica L.） DNA;改进的CTAB方法;隔离：确定沉香树（沉香树L.）又称Bairihong，满堂红属沉香树性别千屈菜科[1]，是一个树种广泛栽培的花，这是的痒树徐州市的花。起源于东亚的温带地区，在东亚地区广泛分布，是中国夏季景观建筑的主要种类。薇是灌木或小落叶乔木，高达7米高，峰值不尖锐，树皮光滑，浅棕色和分支具有四个边，叶片是相反的，该椭圆是圆形到柜子，3到7厘米长;生，花是红色，紫色。
究表明紫微有很多作用[2]。物DNA的提取和纯化是植物基因工程研究的基本操作，并使用分子标记。因库构建，基因分离，遗传转化和鉴定都依赖于DNA提取。何以简单有效的方式提取纯净且易于合格的大分子双链DNA一直是植物生物技术研究人员关注的问题。物细胞，不像动物细胞，含有除细胞壁，这对在提取和纯化DNA许多困难大量多糖，脂类，色素和酚类物质。常用于提取植物DNA的试剂主要是CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）和SDS（十二烷基磺酸钠）[3-6]。CTAB和SDS可破坏植物细胞膜以促进细胞内容物的释放。外，CTAB可以形成与核酸形成复合物，这是有利的，以在蛋白质和SDSdénaturés.Le多糖可形成具有蛋白质，多糖等复合物的DNA分离出来，并从分离离心DNA。内外学者对种植，养殖，引进进行了研究，培育新品种，形态分类，进化，数量分类，生理生化特性，病虫害防治等。[7-10]，很少有关于分子生物学的研究。[11-12]。
于沉香树叶中的多酚和多糖等次级代谢物含量较高，因此从叶中提取DNA也很困难。此，作者使用沉香树叶为原料提取和纯化基因组DNA沉香树，探讨测试方法，用于提取和有效地净化的基因组DNA沉香树（Lagerstroemia indica），为进一步研究提供DNA材料。料和方法测试材料由新鲜的沉香树叶组成。试方法该测试使用改进的CTAB方法。体步骤如下。加2000微升2×CTAB提取缓冲液（2％CTAB，100mmol·L-1的Tris-HCl，20mmol·L-1- NA2 EDTA，1.4莫尔-1 NaCl）中在管离心10毫升。1％PVP）和80微升β巯基乙醇的预热至65℃1〜2克柔软的面料，用蒸馏水冲洗，用无菌ddH 2 O中，发生在预冷的研钵中与冲洗两次液氮，加入液氮到粉末，使用不锈钢匙清洁和无菌转移到预热的离心管中的粉末，总体积为3至4ml，在水混合和存储在65°C结晶45至60分钟，然后轻轻旋转管。加氯仿的等体积/异戊醇（24：1），通过倒置轻轻地混合，在10 000转/分钟离心在室温下1分钟，并除去上清液至新管。加的RNA酶A 1/100体积的溶液（10mg·mL的-1）在管中在37℃下20-30分钟，加入2倍体积的无水乙醇中，置于-20℃下30分钟，12 000 R·将DNA沉淀物以1rpm回收离心10分钟，将沉淀用70％乙醇洗涤，干燥并溶于50μl无菌ddH 2 O中洗涤两次。因组DNA完整性通过琼脂糖凝胶电泳在1％的检测，在260nm和280nm处提取的DNA的吸光度是通过在紫外分光光度计测定，计算浓度和分析纯度，提取提取的DNA。存在-20°C的冰箱中以备后用。DNA完整性检测结果和分析通过1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，水作为空白对照，电泳缓冲液被1个TBE，电压为80 V，电泳80分钟进行，然后UV观察缩合和模仿上凝胶成像系统下，DNA的质量检测沉香树的所获得的结果如图1所示，DNA的主带非常清晰，没有扩散带，表明提取的DNA具有良好的完整性。
浓度和提取的DNA的纯度通过服用纯化沉香树DNA的少量测定，稀释50倍，通过测量260nm处的吸光度，并在下紫外分光光度计280nm和计算所述值A260 / A280和DNA浓度（表1）。）。
1示出了DNA提取物具有440纳克·微升-1的高浓度，但是纯度是通用的并且可以存在次级代谢产物如多酚和多糖。论由于次级代谢产物如在沉香树叶多酚和多糖的高含量的，以避免杂质沉香树叶的提取过程中的增加，拾取效果嫩叶很好。前研磨，将叶子在4℃在冰箱中放置2天以消化叶片中的糖含量，酚类物质除去和β巯基乙醇和PVP加入到提取缓冲液防止材料变褐。常通过将其放置在研钵中并通过倒入液氮中研磨快速油炸，然后在离心管转移研磨的样品并添加缓冲液进行提取研材料DNA。方法需要大量材料并且使用复杂并且不适合于检测大量转基因植物样品。报道的是石英砂加入到离心管中，然后将其倒入液氮中快速冷冻，
沉香树然后用杆verre.Cette方法地可加快研磨，但玻璃棒N不像用离心管改装的螺丝刀那样方便快捷。用改进的螺丝刀研磨时，离心管中的材料不应太大，应冷冻液氮，研磨应足够。验表明，研磨越完整，DNA提取量越大越重要。个研磨过程在冰上进行以防止DNA降解。DNA提取过程中，低温维持和温和的作用可以有效地防止DNA降解。因组DNA从使用改良CTAB法的沉香树叶中提取，结果表明，该提取的DNA显示无明显降解，并且具有高浓度和纯度。到的DNA可以在随后的分子生物学实验中使用。
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